Wie das Beer-Lambert-Gesetz die Küvettenwahl bestimmt — empfohlene Schichtdicken für häufige Analyte — und wie Sie im zuverlässigen Absorptionsfenster bleiben.
A = ε · c · l. Die Absorption sollte für zuverlässige Ergebnisse im Fenster von 0,2 – 1,5 liegen. Unter 0,2 ist das Signal-Rausch-Verhältnis schlecht; über 1,5 verfälschen Streulicht und Detektor-Nichtlinearität die Werte. Ihre Wahl der Schichtdicke ist der Hebel, der die Absorption im Bereich hält.
| Analyt / Anwendung | Typische Konzentration | Empfohlene Schichtdicke |
|---|---|---|
| dsDNA (260 nm) | 1 – 50 µg/mL | 10 mm Standard |
| Proteine (280 nm) | 0,1 – 2 mg/mL | 10 mm Standard |
| NADH-Enzymassays (340 nm) | 10 – 200 µM | 10 mm |
| Konzentrierte Farbstofflösungen | Hohes ε | 1 – 5 mm (oder verdünnen) |
| Spurenmetalle / sehr verdünnt | ppb – niedrige ppm | 20 – 100 mm Langweg |
| Wertvolle Mikrovolumen-Proben | Beliebig | 10 mm, 20 – 200 µL Sub-Micro |
Nutzen Sie den Schichtdicken-Rechner, um l = A/(ε·c) aus Ihren Zahlen zu berechnen. Wenn das Ergebnis 10 mm ist, funktioniert eine Standardzelle; wenn es 50 mm verlangt, erwägen Sie Langweg-Zellen oder Vorkonzentration der Probe.
| Schichtdicke | Probenvolumen | scuvette-Zelle |
|---|---|---|
| 10 mm | 20 – 200 µL | Ultra-Micro |
| 10 mm | 0,7 – 3,5 mL | Standard / Micro |
| 20 – 100 mm | 4 – 40 mL | Langweg |
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A = εcl — die Extinktion skaliert mit Schichtdicke l und Konzentration c; wählen Sie eine Optik, sodass A im genauen Bereich 0,1–1,0 bleibt. Leitfaden Schichtdicke.
Kürzere Optik (1–5 mm) oder verdünnen; Kurzoptik ist oft sauberer. Kurzoptik-Kübetten.
Längere Optik oder Probe konzentrieren. Langoptik-Kübetten.
Extinktionskoeffizienten ε sind bei 1 cm (10 mm) definiert, daher gehen publizierte Methoden davon aus. 10-mm-Zelle.
Nur bei Wellenlängen, die es nicht transmitiert — Quarz unter 350 nm, Glas darüber; Material für Ihre Wellenlänge wählen. Quarz vs. Glas.
Sehr lange Optiken verstärken Streulichtfehler; A unter etwa 2,0 halten. Fehlerbehebung.