Pourquoi votre spectrophotomètre affiche des lectures d’absorbance négative — dérive de ligne de base, mésappariement de référence, fenêtres sales, mauvais appariement — et comment corriger chaque cause.
L’absorbance est définie comme log₁₀(I₀/I). Si l’échantillon transmet plus de lumière que la référence — I > I₀ — le logarithme devient négatif. Cela signifie généralement que la référence/le blanc absorbe plus que l’échantillon, ou que la ligne de base s’est décalée en cours de mesure.
| Cause | Symptôme | Solution |
|---|---|---|
| Dérive de ligne de base | Légèrement négative sur tout le balayage | Remise à zéro avec les deux cellules vides ; vérifier le préchauffage de la lampe (15–30 min) |
| Blanc absorbe plus que l’échantillon | Négative à des longueurs d’onde précises | Blanc contaminé ou mauvais solvant — préparer un blanc frais |
| Cellule de référence sale ou non appariée | Décalage négatif constant | Nettoyer les deux cellules ; utiliser une paire appariée en référence |
| Fenêtres rayées/gravées | Négative ou bruitée côté UV | Remplacer la cellule ; vérifier avec une référence propre |
| Erreur de longueur d’onde ou de bande passante | Négative près des pics abrupts | Valider l’étalonnage en longueur d’onde |
| Absorbance du solvant | Négative là où le solvant absorbe | Utiliser un solvant grade spectroscopique ; corriger la ligne de base |
1. Remise à zéro avec les deux cellules vides.
2. Remplacer le blanc par une préparation fraîche.
3. Nettoyer les deux cellules, remettre à zéro.
4. Échanger les positions échantillon/référence — si le signe change, c’est un mésappariement de cellules.
5. Si rien ne fonctionne, vérifier l’âge de la lampe et l’étalonnage en longueur d’onde.
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