Por qué su espectrofotómetro muestra lecturas de absorbancia negativa — deriva de línea base, desajuste de referencia, ventanas sucias, pareo incorrecto de celdas — y cómo corregir cada causa.
La absorbancia se define como log₁₀(I₀/I). Si la muestra transmite más luz que la referencia — I > I₀ — el logaritmo se vuelve negativo. Eso normalmente significa que la referencia/blanco absorbe más que la muestra, o que la línea base se desplazó a mitad de la medición.
| Causa | Síntoma | Solución |
|---|---|---|
| Deriva de línea base | Ligeramente negativa en todo el barrido | Re-cero con ambas celdas vacías; compruebe el calentamiento de la lámpara (15–30 min) |
| Blanco absorbe más que la muestra | Negativa en longitudes de onda específicas | Blanco contaminado o disolvente incorrecto — prepare un blanco fresco |
| Celda de referencia sucia o no pareada | Desplazamiento negativo constante | Limpie ambas celdas; use un par pareado como referencia |
| Ventanas rayadas o grabadas | Negativa o ruidosa en el extremo UV | Reemplace la celda; verifique con una referencia limpia |
| Error de longitud de onda o ancho de banda | Negativa cerca de picos pronunciados | Valide la calibración de longitud de onda |
| Absorbancia del disolvente | Negativa donde el disolvente absorbe | Use disolvente grado espectroscópico; corrija la línea base |
1. Re-cero con ambas celdas vacías.
2. Reemplace el blanco con una preparación fresca.
3. Limpie ambas celdas y vuelva a hacer cero.
4. Intercambie las posiciones de muestra y referencia — si el signo cambia, es un desajuste de celdas.
5. Si nada de lo anterior funciona, compruebe la edad de la lámpara y la calibración de longitud de onda.
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